UF2471 ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

– Aplicar técnicas de PCR y de RT-PCR, teniendo en cuenta protocolos e indicando sus aplicaciones.
– Aplicar técnicas de hibridación con sondas genéticas y de análisis de fragmentos de ADN, siguiendo protocolos preestablecidos.
– Aplicar la técnica de secuenciación de fragmentos de ADN según protocolos preestablecidos.

UNIDAD FORMATIVA 1. ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS
UNIDAD DIDÁCTICA 1. METODOLOGÍA APLICADA AL ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS
Extracción. Purificación y análisis espectroscópico y electroforético de ácidos nucleicos.
– Material y métodos
Amplificación de ADN mediante PCR y variantes.
– El ADN
– Los enzimas
– Los nucleótidos
– Los cebadores
– Limitaciones y problemas de la PCR (tamaño secuencias limitado, PCR previa, contaminación, inespecifidad de cebadores,…)
Electroforesis y técnicas relacionadas.
– Factores que afectan a la movilidad del ADN en el gel (masa molecular, voltaje, composición de las bases, temperatura, solución amortiguadora,…)
– Tipos de electroforesis: PFGE (Pulsed Field Gel Electroforesis), OFAGE (Orthogonal Field Alternative Gel), FIGF (Field Inversion Gel Electroforesis), CHEF (Contour Clamped Homogeneus Electric Field), Electroforesis preparative.
– Aplicaciones: Análisis comparativos de patrones de restricción cromosómicos, construcción de mapas cromosómicos, topología y tamaño de cromosomas, análisis de elementos extracromosómicos
Hibridación de ácidos nucleicos.
– Factores que influyen en la hibridación.
– Composición de las bases.
– Concentración de ADN/ARN y tiempos Cot y Rot
– Concentración y tamaño de la sonda
– Concentración ADN diana
– Desnaturalización del ADN diana y fijación a un soporte.
– Marcaje de una sonda monocadena
– Hibridación: mezcla y renaturalización
– Detección de los híbridos
– Medio de reacción
– Polímeros inertes
– Tiempos de hibridación y mecanismos de detección.
– Tipos de hibridación (soporte sólido, en fase líquida, in situ, in situ sobre cromosomas, in situ de bacterias para clonaje).
Análisis de fragmentos de ADN.
– Método Southerm
– Métodos de transferencia (por capilaridad, por vacío, electroforético)
– Aplicaciones del Método Southerm
– Mapas de restricción
– Detección de polimorfismos (RFLP, VNTR, STR) y deleciones.
Secuenciación.
– Secuenciación química, método de Maxam y Gilbert
– Secuenciación enzimática, método de Sanger o de los dideoxinucleótidos.
– Tipos de secuenciaciones enzimáticas (Cíclica, múltiple, automática, quimioluminiscente)
Tecnología de microarrays y chips de ácidos nucléicos.
– Utilidad: analizar el genoma completo de un organismo
– Fundamento: hibridación con sondas
– Soporte: placas microtitulación o membranas de blotting
– Fabricación: pueden ser creados en el laboratorio o usando robótica : Macroarray: señales > 300 micras y Microarray: pocillos < 200 micras
Aplicaciones: identificación de secuencias (genes, Mutaciones), determinación del nivel de expresión génica, descubrimiento de genes, diagnóstico de enfermedades, Farmacogenómica: desarrollo de Fármacos y Toxicogenómica: investigación Toxicológica
Bioinformática. Bases de datos de genómica.
– Introducción a la Bioinformática
– Consulta de Bases de datos en biología molecular
– Alineamiento de secuencias
– Predicción de genes
– Introducción a los microarrays de DNA
UNIDAD DIDÁCTICA 2. PRINCIPIOS GENERALES DE ENFERMEDADES DE BASE GENÉTICA
Genoma: células, cromosomas y genes.
– Definición de genoma, gen y cromosoma
– Organización, estabilización y localización del genoma
Estructura y función de los genes y cromosomas.
– Estructura del ADN
– Estructura del ARN
– El código genético
– Secuencias codificantes versus no codificantes
Bases cromosómicas de la enfermedad.
– Citogenética. El cariotipo normal en los roedores de laboratorio
– Anomalías del número de cromosomas (Heteroploidías)
– Anomalías de la estructura de los cromosomas
Herencia y enfermedad: enfermedades monogénicas, patrones de herencia, enfermedades poligénicas. Susceptibilidad genética.
– Genético
– Congénito
– Hereditario
Genética de las enfermedades comunes.
– Modelos provenientes de mutaciones espontáneas o inducidas
– Modelos generados por transgénesis
– Modelos generados in Vitro por manipulación de células ES
– Modelos generados por transgénesis condicional
Genética de la reproducción y del diagnóstico prenatal.
– Modelos animales del desarrollo embrionario
– Diagnóstico prenatal rápido de aberraciones cromosómicas por PCR
– Diagnóstico citogenético
– Diagnóstico prenatal de enfermedades hereditarias
Diagnóstico en medicina legal y forense.
– VNTR
– STR
Modelos animales de enfermedad de base genética.
– Modelos murinos de enfermedades hereditarias simples (mendelianas): Desórdenes de la visión, de la audición, neurológicos y neuromusculares. Enfermedades de los huesos y cartílagos, de la piel y el pelo, hematológicas, inmunodeficiencias y metabólicas
– Modelos murinos de enfermedades hereditarias complejas (multigénicas): Cáncer, obesidad, diabetes, etc.